Tehnica Imunoenzimatica ELISA in microplaca
Principiul Testului
- Stripurile din microplaca din polistiren captusite cu antigeni purificati si caractererizati biochimic,sunt utilizate drept faza solida care contine antigeni legati.
- Dacă proba este pozitivă, anticorpii specifici din proba de ser diluat se ataseaza la antigenii cuplati in faza solidă
- In etapa a doua, anticorpii atașati sunt detectati cu anticorpi anti-umani marcați cu peroxidază
- În a treia etapă, anticorpii legați devin vizibili folosind o soluție cromogen / substrat care este capabila de a stimula o reacție de culoare. Intensitatea culorii produsă este proporțională cu concentrația de anticorpi din proba de ser
- Testul ELISA monospecific (test imunoenzimatic cu un singur antigen) furnizează un test cantitativ in-vitro pentru detectarea anticorpilor. “Profile ELISA” furnizeaza un test semicantitativ in-vitro pentru detectarea anticorpilor diferiti pe un singur strip din microplaca.
- Faza solidă a “Pool ELISA” este acoperita cu un amestec de antigen pentru detectarea semicantitativa a anticorpilor a caror specificitate trebuie investigata ulterior prin teste monospecifice.
Calibrarea/Evaluarea – etape ale testarii sigure si economice
- In cazul unei metode cantitative ELISA, calibrarea este efectuată in general cu trei seruri de calibrare:
–Serul de calibrare 1: limita superioară a intervalului de măsurare
–Serul de calibrare 2: limita superioară a intervalului valorilor normale(valoare cut-off)
-Serul de calibrare 3: negativ
- Nu este nevoie pentru incubare de valori blank sau determinări duplicat
- Metoda semicantitativă ELISA se realizeaza folosind un singur calibrator. Curbele de calibrare extinse se gasesc in unele metode ELISA pentru determinarea imunității sau diagnosticare CSF.
- Calibrarea se realizează în unități relative (RU / ml) sau, în cazul în care există un ser de referință internațional, în unități internaționale (UI / ml).
- Fiecare test poate fi efectuat în mod opțional folosind un ser de control pozitiv sau negativ inclus în kit-ul de testare. Intervale de referință specifice ale kit-ului sunt prevăzute pentru fiecare calibrator si ser de control
- Toate metodele de calibrare pot fi de obicei efectuate cu usurinta cu ajutorul software-ul ELISA
Usor, economic si rapid de utilizat
- Stripurile microplacii contin godeuri detasabile (cu exceptia Profile ELISA)
- Pentru a evita amestecarea, benzile microplacii sau godeurile cu reactivi sunt tipărite cu abrevierile antigenilor
- Reagentii sunt gata de lucru (exceptie tampon de spalare: concentrat)
- Codificarea culorilor permite identificarea clara a reagentilor:
–rosu inchis: ser de calibrare 1
–rosu: ser de calibrare 2;
–rosu deschis: se de calibrare 3;
-albastru inchis: ser de control pozitiv;
-verde: ser de control negativ;
–tamponul dilutie proba si conjugatul anti-uman Ig POD: diferite culori;
- Tamponul de proba pentru serologia infecțioasa ELISA (detectarea anticorpilor de clasă IgM) conține deja un absorbent IgG / RF.
- Compatibil cu toate sistemele de spălare și cititoarele comerciale