IMUNOBLOT

Principiul testului

• Sunt folosite drept faza solida stripuri sub forma de membrane captusite cu linii subtiri paralele de mai multi antigeni purificati si biochimic caracterizati. Membranele sunt fixate pe o folie sintetica.
• Daca proba este pozitiva, anticorpii specifici din proba de ser diluat se ataseaza la antigenii cuplati in faza solida.
• In a doua etapa de incubare, anticorpii atasati reactioneaza cu anticorpii anti-umani conjugati cu fosfataza alcalina.
• In cea de-a treia etapa de incubare, anticorpii legati sunt colorati cu o solutie cromogen/substrat, producandu-se o reactie de culoare. Daca proba de ser contine anticorpi, atunci apare o dunga de culoare negru inchis in dreptul liniei de antigen corespunzator.
• In funcție de spectrul de antigeni utilizati, este posibil să se analizeze mai multi anticorpi unul lângă altul în același timp si în condiții identice.

Calibrarea/Evaluarea – etape ale testarii sigure si economice

• Pentru fiecare proba de ser se incubeaza cate un strip.
• Timpul total de efectuare a testului este in jur de 105 minute.
• Incubarea poate fi automatizata, folosind procesorul automat de stripuri.
• Toti pasii de incubare se realizeaza la temperatura camerei.
• Benzile de antigen se află în poziții definite exact, ceea ce înseamnă că evaluarea testului este mult mai simplă decât pentru westernbloturi.
• Finalizarea corecta a pasilor de incubare individuali este indicata de colorarea benzii de control de pe fiecare strip de testare.
• Rezultatele testelor positive si negative pot fi differentiate usor si in siguranta unele de celelalte. Intensitatea benzilor de antigen se coreleaza cu titrul de anticorpi.
• Antigenii folositi sunt de inalta puritate, majoritatea fiind izolati prin afinitate cromatografica. Benzile de membrane nu contin nici o proteina inutila, care sa cauzeze rezultate nespecifice.
• Stripurile de testare incubate pot fi pastrate pentru perioade lungi de timp. Rezultatele pot fi usor arhivate.
• Programul de interpretare al producatorului a fost conceput pentru a permite elaluarea semicantitativa si cantitativa a stripurilor de testare, pentru facilitarea gestionarii datelor, si pentru a furniza documentatia detaliata a rezultatelor. Mai intai, benzile de testare incubate sunt scanate folosind un scanner platforma cu rezolutia de >600 dpi. Softul recunoaste pozitiile benzilor, chiar daca acestea au fost asezate inexact, identifica benzile si le masoara intensitatea. Rezultatele sunt apoi salvate impreuna cu scanarea. Apoi pot fi emise fise individuale de rezultat pentru fiecare pacient in parte.